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                常見問題

                液相色譜:二元高壓梯度與四元低壓梯度的區(qū)別!

                液相色譜 二元有兩個,高壓混合,對氣泡不敏感
                四元只一個,低壓混合,對氣泡較敏感,須配在線脫氣機
                二元高壓混合和四元低壓混合的一個重大區(qū)別就是前者進(jìn)入輸液后立即進(jìn)行混合而后者是進(jìn)以后慢慢混合,有的還要過一混合器,混合不但置后,而且效果明顯不如前者。
                高壓梯度現(xiàn)在很多都可以用一個來控制另一個,而低壓梯度往往需要一個梯度控制系統(tǒng)。
                幾元,分為高壓混合和低壓混合,高壓混合又叫后混合,hplc幾元就是幾個;低壓混合又叫前混合,其實就是一個,幾 元就是安裝幾路電磁閥
                ,可組裝成為二元高壓梯度與四元低壓梯度兩種系統(tǒng),兩者區(qū)別如下:
                二元高壓梯度:
                配置:雙+在線混合器
                工作方式:雙并聯(lián),可同時有兩個流動相,按照預(yù)先設(shè)定的配比進(jìn)入,再高壓下進(jìn)行混合,混合配比更準(zhǔn)確,不易產(chǎn)生氣泡,不用為了轉(zhuǎn)換流動相而反復(fù)清洗,提高了工作效率。同時可以做梯度洗脫,當(dāng)待測樣品成分復(fù)雜,用一個固定的流動相配比無法將樣品中成分完全分開時,就需要用到梯度洗脫,在同一個分析過程中由儀器自動改變流動相配比,將樣品中前次無法分離的物質(zhì)進(jìn)行洗脫,在同一譜圖中得到分開的峰的效果。有助于提高分析準(zhǔn)確性,避免遺漏重要物質(zhì)的檢測。
                hplc四元低壓梯度:
                配置:單+低壓梯度閥+在線脫氣機+混合器
                工作方式:最多可同時有四個流動相進(jìn)入流路,按照預(yù)先設(shè)定的配比進(jìn)行混合,由于在常壓下混合所以較易產(chǎn)生氣泡,因此必須配備在線脫氣機,可消除氣泡影響。可以做梯度洗脫,在儀器上進(jìn)行設(shè)定之后,在同一樣品分析工程中,相隔一段時間后,按照用戶設(shè)定的配比自行改變流動相配比,將樣品中所有組分分離開來,有助于提高分析準(zhǔn)確性。
                做簡單的分析,一般性的化合物用二元的系統(tǒng)就很好,分析如果做蛋白類,多肽等半制備或梯度洗脫還是四元系統(tǒng)方便,但需配在線脫氣機.通過這些年我的經(jīng)驗,我認(rèn)為還是四元好用,如果資金沒問題的話.
                所謂幾元,指的是能同時控制流路的多少.一元,二元,四元都有低壓.如Waters515--一元低壓,waters1515--二元低壓,HP1100--四元低壓。高壓多為二元,再往上做成本太高,實用性也不強。因為二元高壓一般就能滿足廣大客戶的使用了,如watersUPLC.低壓通常只有一個,二元以上可做梯度洗脫,是先混合,經(jīng)在線脫氣機脫氣后進(jìn),而高壓則是有幾元則有幾個,在后混合,通過流速控制配比關(guān)系,不易產(chǎn)生氣泡,但仍配有脫氣機。
                二元高壓梯度流量控制精度更高,混合室在后,高壓下混合效率也高很多、梯度組成精確;四元低壓梯度系統(tǒng)采用單加梯度比例閥來實現(xiàn),因為比例閥是在前的,并且各流路的溶劑在比例閥里就混合在一起了,所以是前、低壓混合。一般地,對于常規(guī)分析來說,四元低壓梯度也可以滿足需要;如果分析樣品成份復(fù)雜、對重現(xiàn)性要求較高,或者需要在低流量下進(jìn)行梯度分析,還是選擇高壓梯度好一些。
                液相色譜從性能上比較:二元高壓肯定由于四元低壓。二元高壓的混合比例是通過改變的流速來獲得的,通常的流速都是很準(zhǔn)的,所以混合的精度也是很高的。四元低壓梯度的混合比例是通過控制不同流路的電磁閥的開閉時間長短來控制的,理論上混合的比例也是準(zhǔn)確的,但是實際上電磁閥的開閉會有一個延遲,無論它動作多么快,總還是需要一點時間的。比如A路和B路各50%混合,在單位時間內(nèi),A路和B路的電磁閥各開通50%的時間,這時問題不大,電磁閥的延遲影響可以通過調(diào)整補償系數(shù)來盡量彌補。但是如果極端一點的情況,A路99%,B路1%,這種情況下單位時間內(nèi),A路的電磁閥開通99%的時間,B路只占 1%,時間是很短的,這時B路電磁閥的延遲就影響很大了,甚至可能延遲的時間比工作的時間還要長,其結(jié)果可想而知。而高壓梯度就不會存在這種問題了。
                從價格上比較:一般情況下,二元高壓梯度的價格會比四元低壓梯度高很多的(如果其他配置都相同的話)。
                二元通常是指高壓梯度,四元指低壓梯度. 高壓是指兩個分別送液在后的混合室內(nèi)混合.而低壓是依靠電磁閥的切換使分段輸送不同流動相,同樣在后的混合室內(nèi)混合.主要區(qū)別在于低壓混合是容易產(chǎn)生氣泡.高壓則不容易產(chǎn)生氣泡.低壓應(yīng)注意清洗,尤其使用緩沖鹽時,避免將電磁閥送液管路堵住.分析

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